破碎細胞和滅活RNA酶同步施行的辦法

更新時間：2012-05-16

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用猛烈改變性別如鹽酸胍或硫氰酸胍溶液能迅疾溶解氨基酸，造成細胞結構破碎，核蛋白因為其二級結構的毀傷而從核酸上解離下來。RNA酶可耐受多種處置等，因為這個可聯用上面所說的試藥，從團體中，如富含RNA酶的胰腺中，提出取得完整無缺的RNA。下述實驗手續系列利用RNA酶制約劑和（或）能迅疾滅活RNA酶的相關辦法從團體或細胞培育物中離合總RNA、核內RNA和胞質內RNA.

這一從培育的單層哺乳動物細胞中離合RNA的實驗手續系為Favaloro 等（1980）所紹介手續的改良。該手續一樣適合使用于從懸浮培育的哺乳動物細胞中或從便于散布成單個細胞的哺乳動物團體中離合RNA.但不舒服合使用于從固體團體中提出取得RNA,由于用這種裂解細胞的辦法（在SDS存在的條件下用蛋白酶K克化）去克化團體速度很慢，造成內源性RNA酶在被蛋白酶K克化或被制約劑滅活前有時候間施展效用。原方案中（Favaloro等。1980）認為合適而使用的裂解緩和沖突液包括0.015 （W/V）的Macaloid（硅藻土），用于吸附并滅活RNA酶。盡管現仍有Macaloid賣出NL Chemicals），但氧氣釩核糖核苷復合物和RNA酶的氨基酸制約劑更常用。下述手續的長處是速度快，并能同時處置眾多樣品。

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